2、如何解凍胎牛血清才不會使產(chǎn)品質量受損?

　　我們建議您將胎牛血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。

　　3、胎牛血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?

　　血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質量。

　　若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。

　　4、為什么要熱滅活血清?

　　加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養(yǎng)ES細胞，昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。

　　5、有必要做熱滅活嗎?

　　實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

　　因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來，不但節(jié)省您寶貴的時間，更確保血清的質量！

　　6、為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)沉淀？

　　GIBICO的胎牛血清 沒有預老化，儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在－20℃儲存胎牛血清，避免反復凍融。

　　7、如何避免沉淀物的產(chǎn)生?

　　我們建議您在使用血清的時候，注意下列的操作: • 解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

　　解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

　　請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質量。

　　血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

　　若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

　　8、如何評估ES細胞合格的胎牛血清?

　　使用D3 ES細胞。這是一個對于胎牛血清中生長促進、生長抑制和分化因子非常敏感的細胞系。

　　相關生長效率分析：

　　當ES細胞以非常低的密度傳入包含10％胎牛血清的生長培養(yǎng)基中，檢測啟動和支持ES細胞克隆的能力。

　　細胞毒分析：當以非常低的密度傳入包含30％胎牛血清的生長培養(yǎng)基中，檢測ES細胞和feeder細胞的生長能力。

　　相關形態(tài)學和分化分析：檢測胎牛血清支持未分化ES細胞克隆的能力。通過堿性磷酸酶活性評估分化程度。未分化的ES細胞小顏色深紅粉紅，分化的細胞較大，豐滿，顏色較淺。所有的分析在沒有ESGRO的情況下進行，培養(yǎng)基中出現(xiàn)ESGRO會掩蓋由胎牛血清所導致的問題。培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)大約8批血清中有1批可以用來培養(yǎng)ES細胞。